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“單槍匹馬”伏癌菌,免疫親和柱新上市

更新時間:2022-11-02 點擊次數:1428

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   01、概述


伏馬菌素 (Fumonisin FB) 是一種霉菌毒素,是由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme Sheld)產生的水溶性代謝產物,是一類由不同的多氫醇和丙三羧酸組成的結構類似的雙酯化合物。伏馬菌素主要污染糧食及其制品,并對某些家畜產生急性毒性及潛在的致癌性,有報道指出,伏馬菌素主要損害肝腎功能,能引起馬腦白質軟化癥和豬肺水腫等,并與我國和南非部分地區高發的食道癌有關,現已引起世界范圍的廣泛注意。已成為繼黃曲霉毒素之后的又一研究熱點。




月旭科技新推出伏馬毒素(B1/B2/B3)免疫親和柱,適合于和HPLC或LC-MS結合使用,定量檢測FB1、FB2和FB3。適用于糧谷、飼料等樣本中的伏馬毒素凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用于不同的分析方法測定。



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 02、原理

凈化的基礎是抗原抗體反應,伏馬毒素單克隆抗體連接在柱內凝膠介質上,樣品中的伏馬毒素經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過伏馬毒素免疫親和柱,在免疫親和柱內,伏馬毒素與抗體結合,洗滌液通過免疫親和柱除去未被結合的雜質。最后采用甲醇-乙酸洗脫伏馬毒素,然后進行相關分析。

03化步驟


1)準確稱取20g(精確至0.01g)粉碎的樣品;

2)先加入50mL樣品提取液混合,搖床振蕩提取30min,于4000r/min,離心5min,取出上清液于試劑瓶中;

3)將底部沉淀部分再加入50mL樣品提取液混合,以搖床振蕩提取30min,于4000r/min,離心5min,取出上清液,與前面的上清液合并混勻;

4)準確移取10mL上清液,加入40mL 1.5%吐溫20-PBS稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。

5)準確移取15mL混勻濾液(相當于0.6g樣品)過親和柱。

6)3mL柱管上方堵頭直接連接20mL針筒固定后使用(柱管內偶見有小氣泡屬正常現象,不影響親和柱的使用);

7)準確移取上述混勻濾液,注入注射器中,調節針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;

8)先用10mL PBS沖洗柱子,再用3mL水沖洗柱子,棄去流出液,流速1秒/滴,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體;

9)準確加入3.0mL洗脫液洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體。收集全部洗脫液,進行相關測定。

(注意:整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!)

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04、色譜條件

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流動相配置


流動相A :移取0.2mL 甲酸,加水至200mL混勻,經0.22μm濾膜抽濾,即得;


流動相B:分別移取200mL色譜級乙腈和甲醇,混勻,經0.22μm濾膜抽濾,即得。


質譜條件


離子源:ESI;

檢測方式:MRM;

干燥氣:氮氣,450℃;

流速:1000L/Hr;

碰撞氣:氬氣;

離子噴霧電壓:1.0kV。

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05、譜圖展示

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06、結果展示

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【 產品信息 

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