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C18液相色譜柱的流動相配制及污染再生技術

更新時間:2020-10-18 點擊次數:4396
   C18液相色譜柱的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。
 
  C18液相色譜柱的流動相配制:
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,并且保證樣品不會在色譜柱內析出或長時間留在色譜柱內;
  b、流動相不與樣品發生反應;
  c、流動相粘度盡量小,使樣品得到高效分離的同時降低柱壓,延長色譜柱壽命;
  d、流動相沸點不能太低,避免有氣泡產生,影響實驗進行;
  e、流動相要保證現配現用,不能儲存太久,避免流動相生成雜質微生物影響檢測;
  f、流動相使用前先脫氣。
 
  C18液相色譜柱污染再生技術:
  色譜柱污染后,可以用合適的溶劑沖洗,使柱效再生。
  常規的再生洗滌方法是:分別用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60mL依次通過色譜柱,再用100%甲醇60mL平衡色譜柱后封存,柱效將恢復正常。必要時,根據柱污染性質(如有機污染、鹽類污染等),采用0.05mol/LH2SO4、0.5mol/LH3PO4或0.1mol/LEDTA鈉鹽沖洗,然后再用水沖洗,用100%甲醇平衡色譜柱后封存。對于嚴重污染的色譜柱,可采用水、甲醇、乙烷依次沖洗后,按順序倒過來再沖洗1次,每次所用溶劑60mL,不接檢測器,用甲醇平衡色譜柱封存。

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